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技术专栏

免疫分析技术

利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质(药物、激素、蛋白质、微生物等)的分析.主要集中在以下几方面:(1)实验药物动力学和临床药物学中测定生物利用度和药物代谢动力学数等;(2)在药物的临床检测中,监测药物血液浓度;(3)在线监测药物生产中有效组分的含量;(4)对药品中特定的微量有害杂质进行评价。

免疫分析分类

非标记免疫分析技术:免疫扩散、免疫电泳

标记的免疫分析技术:酶免疫分析、放射免疫分析、其它免疫分析法(荧光免疫技术、胶体金免疫技术、发光免疫技术和铁蛋白免疫技术等)

免疫扩散

基本原理:可溶性的抗原和相应的抗体在溶液或凝胶中彼此接触,形成不溶性抗原-抗体复合物沉淀。

单向免疫扩散(Single immunodiffusion)

基本原理:指抗原和抗体两 种成分中只有一种扩散,另 一种被固定在凝胶中。

双向免疫扩散(Double immunodiffusion)

基本原理:指可溶性抗原与相应抗体在琼脂介质中相互扩散,彼此相遇后形成一定类型的特异性沉淀线。

电泳技术分类

基本原理:免疫扩散与电泳技术相结合。

类型:对流免疫电泳、火箭免疫电离、免疫电泳、双向免疫电泳(交叉免疫电泳)

对流免疫电泳

基本原理:多数蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷,在电泳时从负极向正极移动。抗体在碱性缓冲液只带微弱的负电 荷,且相对分子质量较大,电泳力较小,在琼脂电渗力作用 下由正极向负极移动。结果抗原和抗体定向对流,在两孔间 相遇时发生反应,并在比例合适处形成肉眼可见白色沉淀线。

火箭免疫电泳(Rocket immunoelectrophoresis)

基本原理:也称免疫扩散,抗原在含有定量抗体的琼脂糖中泳动,两者比例适宜时,在较短时间内生成锥形的沉淀峰。在一定浓度范围内,沉淀峰的高度与抗原含量成正比。

免疫电泳

基本原理:先将待侧样本作琼脂凝胶电泳,各蛋白抗原组分被分成不同的区带,然后与电泳方向平行挖一小槽,加入相应的抗血清,把分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散,在各区带相应的位置形成沉淀弧。 

标记技术分类

基本原理:采用荧光素、同位素或酶等示踪物质 标记抗体(或抗原)进行抗原 -抗体反应,通过对免疫复合物中的标记物的测定,达到对免疫反应进行监测的目的。

标记免疫技术主要类型:放射免疫技术、酶免疫技术、荧光免疫技术、化学发光免疫技术

放射免疫标记技术(RIA

基本原理:根据抗原抗体特异性结合的原理,以放射性同位素标记抗原或抗体,根据射线的多少定性或定量测定待检标本中抗体或抗原的量。

酶免疫标记技术(ELISA

基本原理:指酶标记抗体或酶标记抗体进行的抗原抗体反应,然后通过酶与底物产生颜色反应,用于定量测定。

荧光免疫分析(FIA

基本原理:以荧光素标记抗体或抗原作为示踪剂的一种新的免疫分析技术,其原理与ELISA相似。该法既可对液体中的抗原和抗体定量,也可对组织切片中的抗原、抗体进行定性和定量。一般由于样品、试剂的自身荧光和激发光的散射,本底荧光高,影响了测定的灵敏度。一般以镧系元素作为荧光标记(示踪剂)。示踪剂与相应抗原或抗体结合后,借助荧光检测仪察看荧光现象或测量荧光强度,从而判断抗原或抗体的存在、定位和分布情况或检测受检标本中抗原或抗体的含量。

胶体金免疫技术(CGIA 

基本原理:以胶体金作为示踪标记物,主要利用了金 颗粒具有高电子密度的特性 ,在金标蛋白结合处,在显 微镜下可见黑褐色颗粒,当 这些标记物在相应的配体处 大量聚集时,肉眼可见红色 或粉红色斑点。

化学发光免疫技术(CLIA 

基本原理:利用化学或生物发光系统作为抗原抗体反应的指示系统,借以定量检测抗原或抗体的方法,发光物质可直接作为抗原抗体的标记物,也可以游离形式用于催化剂(酶)和辅助剂标记的抗原或抗体的发光反应中。

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